قرار مؤرخ في أول ذي القعدة عام 1447 الموافق 19 أبريل سنة 2026، يجعل منهج كشف وتحديد كمية الهيستامين في السمك والمنتوجات الصيدية بواسطة تقنية الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، إجباريا

تطبيقا لأحكام المادة 19 من المرسوم التنفيذي رقم 90-39 المؤرخ في 3 رجب عام 1410 الموافق 30 يناير سنة 1990 والمذكور أعلاه، يهدف هذا القرار إلى جعل منهج كشف وتحديد كمية الهيستامين في السمك والمنتوجات الصيدية بواسطة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، إجباريا.

من أجل كشف وتحديد كمية الهيستامين في السمك والمنتوجات الصيدية بواسطة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، تلزم مخابر قمع الغش والمخابر المعتمدة لهذا الغرض، باستعمال المنهج المحدد في الملحق المرفق بهذا القرار.

يجب أن يستعمل هذا المنهج من طرف المخبر عند الأمر بإجراء خبرة.

تلغى أحكام القرار المؤرخ في 12 جمادى الثانية عام 1427 الموافق 8 يوليو سنة 2006 الذي يجعل منهج تحديد الهيستامين في منتوجات الصيد البحري بواسطة كروماتوغرافيا في طور سائل ذات دقة عالية، إجباريا.

ينشر هذا القرار في الجريدة الرّسميّة للجمهورية الجزائرية الدّيمقراطيّة الشعبيّة.

حرّر بالجزائر، في أوّل ذي القعدة عام 1447 الموافق 19 أبريل سنة 2026 .

أمال عبد اللطيف –––––––––––––––––––––––– الملحق منهج كشف وتحديد كمية الهيستامين في السمك والمنتوجات الصيدية بواسطة تقنية كروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء .1 مجال التطبيق :

يحدد هذا المنهج تقنية الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء )HPLC( لتحليل الهيستامين في السمك والمنتوجات الصيدية (صلصات بالسمك، الأسماك التي خضعت لمعالجة النضوج الإنزيمي في المحلول الملحي... إلخ)، الموجهة للاستهلاك البشري. .2 المبدأ :

يسمح هذا المنهج بفصل الهيستامين عن الأمينات الحيوية للسمك والمنتوجات الصيدية. وتستخلص العينة بخلطها مع حمض البيركلوريك. يتم الاشتقاق ما قبل العمود بواسطة كلورير دانسيل. تفصل الأمينات الحيوية والمكونات الموجودة في المحلول بواسطة تقنية الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء )HPLC( مع عمود مناسب، عن طريق الكشف بالأشعة فوق البنفسجية )UV( .

يحسب التركيز الكتلي للهيستامين وفقا لنسبة مساحة ذروات الهيستامين على المعيار الداخلي، مع منحنى المعايرة. 12 الجريدة الرسميّة للجمهوريّة .3 الكواشف والمعدات :

عدا أحكام مخالفة، تستعمل فقط كواشف ذات نوعية تحليلية معترف بها والماء من النوعية 1 المحددة في المعايير المعترف بها.

عدا أحكام مخالفة، يجب أن تكون المذيبات من نوعية الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء )HPLC( . 1.3 الأسيتون، COCH3 CH3 . 2.3 أسيتونتريل، CN CH3 . 3.3 تولوين، H8 C7 . 4.3 الماء، من نوعي )HPLC( . 5.3 الماء، مقطر أو ما يعادله. 6.3 الأزوت، الغاز. 7.3 حمض البيركلوريك، ( c)HCIO4 = 2 مول / ل.

يخفف 19,5 ملل من HCIO4 65 % أو 17,2 ملل من HCIO4 70 % في 1000 ملل من الماء ( 5.3 .) يكون المحلول مستقرا لمدة ستة (6) أشهر إذا تم حفظه في درجة حرارة الوسط (بين 15 °م و 25 °م). 8.3 محلول مشبع من كربونات الصوديوم CO3 Na2 :

يذوّب 110 غرام من كربونات الصوديوم في حوالي 150 ملل من الماء ( 5.3 .) يكون المحلول فائضا ومستقرا لمدة ثلاثة (3) أشهر، إذا تم حفظه في 5 °م ± 3 °م. 9.3 محلول كلورور الدانسيل، 7,5 = S( ClNO2 H12 )C12 ρ ملغ / ملل.

يذوّب 0,375 غ من كلورور الدانسيل في 50 ملل من الأسيتون ( 1.3 .) يكون المحلول مستقرا لمدة ثلاثة (3) أسابيع إذا تم حفظه بعيدا عن الضوء وفي درجة حرارة أقل من

- 18 درجة مائوية. 10.3 محلول ل - برولين، ( NO2 H9 ρ)C5 = 100 ملغ/ملل.

يذوّب 1 غ من ل - برولين في 10 ملل من الماء ( 5.3 .) يكون المحلول مستقرا لمدة ثلاثة (3) أسابيع، إذا تم حفظه في 5 °م ± 3 °م. 11.3 محلول الهيستامين الأم، ( N3 H9 ρ)C5 = 12,5 ملغ/ملل.

يذوّب 1,034 غ من ثنائي كلورهيدرات الهيستامين في 50 ملل من الماء ( 5.3 .) يكون المحلول مستقرا لمدة سنة واحدة إذا تم حفظه في درجة حرارة أقل من - 18 °م. 12.3 محلول الأم للمعيار الداخلي )IS( 1,7 - ديامينوهبتان، ( N2 H18 p)C7 = 6,4 ملغ/ ملل.

يذوّب 0,320 غ من 1,7 - ديامينوهيبتان في 50 ملل من الماء ( 5.3 .) يكون المحلول مستقرا لمدة ثلاثة (3) أسابيع إذا تم حفظه في درجة حرارة 5 °م ± 3 °م. .4 الأجهزة 1.4 جهاز سحق، على سبيل المثال الخلاّط. 2.4 موازين، بدقة 0,1 غ و 0,001 غ بالتقريب. 3.4 جهاز التجانس، ذو قضبان معدنية. 4.4 جهاز الطرد المركزي، مبرد، قادر على إجراء عملية الطرد المركزي بسرعة 8000 g . 5.4 أنابيب الطرد المركزي، من البلاستيك مع أغطية. 6.4 ماصات، بتدرج 20 ميكرولتر إلى 200 ميكرولتر و 100 ميكرولتر إلى 1000 ميكرولتر. 7.4 أنابيب، زجاجية مقاومة للحرارة، مع أغطية. 8.4 جهاز فورتاكس. 9.4 حمام مائي، 60 °م ± 1 °م مع غطاء داكن أو ما يعادله. 10.4 ثلاجة، قادرة على تثبيت درجات الحرارة التي تتراوح بين 5 °م ± 3 °م. 11.4 مجمد، قادر على تثبيت درجات الحرارة إلى أقل من- 18 °م. 12.4 مبخر نيتروجيني. 13.4 إبر، ذات سعة 20 غ، 0.9 مم، للاستعمال الوحيد. 14.4 مرشحات، 0,2 ميكرومتر، للاستعمال الوحيد [بولي تترافلورو إيثيلين )PTFE( / بولي بروبيلين )PP( .] 15.4 الحقنات ذات سعة 2 ملل، للاستعمال الوحيد. 16.4 نظام الكروماتوغرافيا السائلة )CPL(، مضخة، ملقم عينات آلي مبرد، فرن ( 25 °م ± 2 °م)، كاشف = λ UV 254 نانومتر )UV( . 17.4 عمود CPL، 5C18 ميكرو متر 100 Å ( 25 سم × 4,6 مم) أو ما يعادله. 18.4 قارورة زجاجية لملقم العيّنات الآلي، 2 ملل، مزودة بأنبوب إدخال ( 200 ميكرولتر) وسدادة. .5 طريقة العمل : 1.5 تحضير العينة :

تجانس العيّنة (لحم السمك) عن طريق طحنها في الخلاط وفقا للفقرة ( 1.4 .) تنقل العيّنة المأخوذة للتجربة التي يبلغ وزنها 5 غ ± 0,1 غ من خليط السمك المتجانس في أنبوب الطرد المركزي وفقا للفقرة )5.4( . 2.5 الاستخلاص :

يضاف 10 ملل من حمض البيركلوريك ( 7.3 ) و 100 ميكرولتر من 1,7 - ديامينوهبتان ( 12.3 ) إلى 5 غرام من السمك في أنبوب الطرد المركزي ويخلط ( 3.4 .) بعد التجانس الكامل، تجرى عملية الطرد المركزي ( 4.4 ) عند 8000 g لمدة خمس (5) دقائق عند 4 °م. 3.5 الاشتقاق :

ينقل 100 ميكرولتر من السائل الطافي إلى أنبوب ( 7.4 ) ثم يضاف 300 ميكرولتر من محلول كربونات الصوديوم ( 8.3 ) و 400 ميكرولتر من كلورور دانسيل )9.3( .

يرج بجهاز فورتاكس ( 8.4 ) ويوضع الأنبوب ويحضن في حمام مائي ( 9.4 ) لمدة خمس (5) دقائق بعيدا عن الضوء عند 60 °م.

يبرد الأنبوب بماء الحنفية البارد ويضاف 100 ميكرولتر من محلول ل - برولين )10.3( .

يرج بجهاز فورتاكس ( 8.4 ) ويوضع الأنبوب بعيدا عن الضوء لمدة خمس عشرة ( 15 ) دقيقة.

ملاحظة :

يمكن حفظ السائل الطافي في درجة حرارة أقل من - 18 °م لمدة أسبوع. 4.5 التنقية : يضاف 500 ميكرولتر من التولوين ( 3.3 ) ويرج في جهاز فورتاكس )8.4( .

ملاحظة 1 : يمكن إيقاف العملية في هذه اللحظة في حالة حفظ درجات حرارة أقل من - 18 °م لمدة أقصاها أسبوع.

تنقل أكبر كمية ممكنة من الطور العضوي العلوي في أنبوب جديد ( 7.4 ) وتجفف تحت الشفاط بتدفق أزوتي )12.4( .

ملاحظة 2 : يحتوي الطور العضوي التولوين على الهيستامين المشتق، على عكس الطور غير العضوي (المائي). يمكن استرجاع الطور العضوي بسهولة عن طريق تجميد الطور المائي >( - 18 °م لمدة ثلاثين ( 30 ) دقيقة على الأقل). زيادة على ذلك، يمكن أن تُحسن عملية التجميد جودة الطور العضوي العلوي.

يوضع ثانية على شكل محلول معلق الأنبوب الجاف بإضافة 200 ميكرولتر من الأسيتونيتريل ( 2.3 ) والماء ( 4.3 ) (الجزء الحجمي 40/60 ) ويرج في جهاز فورتاكس )8.4( .

يصفى المحلول ( 13.4 و 14.4 و 15.4 ) في قارورة بملقم العيّنات الآلي من الزجاج ( 18.4 ) ويملأ ملقم العيّنات الآلي )16.4( . 5.5 شروط نظام الكروماتوغرافيا السائلة )CPL( (الملحق أ) : 6.5 مجموعة العيّنات المرجعية :

يستحسن تحضير عيّنات مرجعية بإضافة أحجام من المحلول الأم للهيستامين ( 11.3 ) لتجانس العينات المحضرة وفقا للفقرة ( 1.5 ) انطلاقا من مادة خالية من الهيستامين.

تضاف الأحجام كما هو مبيّن في الجدول 1 إلى العينة الخالية من الهيستامين والانتقال إلى مرحلة الاستخلاص ( 2.5 ) ثم إلى الاشتقاق ( 3.5 ) والتنقية ( 4.5 ) ونظام الكروماتوغرافيا السائلة )CPL(، وفقا للفقرة 5).5( .

لتجنب تأثير المادة والانحراف، يجرى خط المعايرة على نفس المادة (خالية من الهيستامين)، كما في العينة المحلّلة.

الجدول 1 - مثال حول تحضير عينات مرجعية :

المستوى ملغ/ كلغ حجم المحلول الأم للهيستامين ( 11.3 ) ميكرولتر 0 0 25 10 50 20 100 40 250 100 500 200 .6 الحساب 1.6 منحنى المعايرة حساب دالة المعايرة عن طريق تحليل الانحدار الخطي بواسطة العينات المرجعية للهيستامين وفقا للفقرة ( 6.5 ) والمعاير الداخلي، وفقا للمعادلة (1) :

AHS CHS x = ( )CHS f (1) AIS حيث :

CHS : هو التركيز الكتلي للهيستامين في العينة المرجعية (ملغ/كلغ)، AHS : هي مساحة الذروة لمعاير الهيستامين، AIS : هي مساحة الذروة لمعاير الداخلي. 2.6 تحديد كمية الهيستامين :

يحسب تركيز الهيستامين في العينة بواسطة المعادلة

(2) (معادلة الانحدار) : 5 AH X m AIS = CH (2) a حيث :

CH : هو التركيز الكتلي المقاس للهيستامين في العينة (ملغ/كلغ)، 14 الجريدة الرسميّة للجمهوريّة AH : هي مساحة الذروة للهيستامين، AIS : هي مساحة الذروة للمعاير الداخلي، a : هو ميل خط المعايرة، m : هي كتلة العينة المقتطعة.

تعادل الكتلة m عموما 5 غ، ولكن إذا كان تركيز العينة يقع خارج مجموعة العينات المرجعية، يجرى تحليل جديد بأصغر العينة المأخوذة للتجربة قصد احترام المجموعة الخطية المتعلقة بتمثيل العينة.

ملاحظة : إذا كانت المادة معقدة أو يصعب الحصول على وضعية الهيستامين الحر (مثل فرينة السمك وصلصة السمك،.... إلخ)، يمكن إجراء منهج المضافات المعيّرة مباشرة. .7 الموثوقية : 1.7 حد التكرارية :

يجب ألاّ يتجاوز الفرق المطلق بين نتيجتي تجربتين فرديتين مستقلتين أو نسبة القيمة القصوى على القيمة الدنيا لنتيجتي التجربتين، المتحصل عليهما بواسطة نفس المنهج على نفس المادة الخاضعة للتجربة في نفس المخبر من طرف نفس التقني، الذي يستعمل نفس الأجهزة في فترة زمنية قصيرة، حد التكرارية r إلا في %5 من الحالات على الأكثر. تعطى قيم التكرارية المتعلقة بالتجربة ما بين المخابر في الجدول (2) . 2.7 حد إعادة التجربة :

يجب ألاّ يتجاوز الفرق المطلق بين نتيجتي تجربتين فرديتين مستقلتين، متحصل عليهما بواسطة نفس المنهج على نفس المادة الخاضعة للتجربة في مخابر مختلفة من طرف تقنيين مختلفين يستعملون أجهزة مختلفة، حد إعادة التجربة R إلاّ في %5 من الحالات على الأكثر. تعطى قيم إعادة التجربة المتعلقة بالتجربة ما بين المخابر في الجدول .2 الجدول 2 : القيم المتوسطة، حدود التكرارية )r( وإعادة التجربة )R(، التي تم الحصول عليها بالنسبة للهيستامين خلال التجربة ما بين المخابر. x̅ r R ملغ/كلغ ملغ/كلغ ملغ/كلغ سمك التونة 24,01 12,24 21,67 93,10 15,93 34,02 200,30 17,98 54,24 سمك الرنجة 11,07 18,79 19,71 26,87 3,86 10,98 89,65 15,62 24,44 سمك الماكارو 18,35 7,53 10,84 70,11 7,45 25,17 146,80 24,61 60,90 الملحق أ توصيات تتعلق بعملية الفصل عن طريق الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء )HPLC( .

أ.1 شروط نظام الكروماتوغرافيا السائلة )CPL( :

يمكن استعمال نظام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء )HPLC( واستعمال نظام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء جدا )UHPLC( . العوامل المعطاة في هذا القسم هي أمثلة توضيحية لأنها تختلف حسب الجهاز والعمود المستعملين.

تتبع تعليمات المصنع.

- حجم الحقن : 20 ميكرولتر، العمود : C18 أو ما يعادله، الفرن : 25 °م ± 2 °م، درجة الحرارة : 5 °م ± 2 °م، الطور المتحرك : 1 ملل/ دقيقة.

تدرج المذيب : أسيتونيتريل/ ماء.

أ.2 ترتيب حقن العينات :

تحقن العينات حسب الترتيب الآتي :

– الأسيتونيتريل النقي (مراقبة التداخلات)،

– العينات المرجعية،

– العينات،

– عينات مراقبة المعايرة المستمرة )CCV( (تركيز مطابق لمنحنى معايرة التركيز)،

– الأسيتونيتريل النقي (غسل العمود).

أ.3 مجموعة الشطف (الجدول أ.1) الجدول أ.1 : مثال عن مجموعة الشطف المطبقة على عمود C18 5 ميكرومتر 100 A ( 25 سم × 4.6 مم).

الزمن (الدقيقة) الماء % أسيتونتريل % 0 40 60 11 25 75 11,1 5 95 20 5 95 20,1 40 60 30 40 60 24 ربيع الأوّل عام 1448 ه الجريدة الرسميّة 6 سبتمبر سنة 2026 م أ.4 مخطط الكروماتوغرافيا (أنظر الشكل A1 ) التسمية .1 بيترسين .2 كدافرين .3 الهيستامين .4 معاير داخلي .5 تيرامين الشكل A1 : مثال عن الكروماتوغرافيا المجراة على .6 سبيرمدين .7 سبيرمين x . دقائق .y mAU التونة التي تحتوي على أمينات حيوية ( بيترسين وكدافرين والهيستامين تيرامين وسبيرمدين وسبيرمين) لمستوى 100 ملغ/ كلغ وعلى معاير داخلي )12.3( . 16 الجريدة الرسميّة للجمهوريّة