المادة 3

ينشر هذا القرار في الجريدة الرّسميّة للجمهورية الجزائرية الدّيمقراطيّة الشعبيّة.

حرّر بالجزائر في 13 محرّم عام 1447 الموافق 9 يوليو سنة 2025 .

الطيب زيتوني ––––––––––––––––––– الملحق منهج معايرة الغلوكوز والفركتوز والسوربيتول والسكروز في عصائر الفواكه والخضر بواسطة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء .1 مجال التطبيق يحدد هذا المنهج تقنية معايرة نسبة الغلوكوز والفركتوز والسوربيتول والسكروز في عصائر الفواكه والخضر ومنتجاتها المشتقة باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء )CLHP( .

لا يسمح هذا المنهج بمعايرة السكروز في وجود المالتوز بسبب تداخل الذروات. .2 الرموز والاختصارات لاحتياجات هذا المنهج، تطبق الرموز والاختصارات الآتية : 1.2 الرموز c : تركيز المادة، ρ : التركيز الكتلي، g : التسارع الناتج عن الجاذبية على سطح الأرض، 2( ms- )9,81 2.2 الاختصارات CLHP : كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء، EDTA : حمض الإيثيلين ثنائي الأمين رباعي الأستيك. .3 المبدأ يتم فصل السكريات والسوربيتول على رزين )Résine( لتبادل الكاتيونات (مركب بوليمر البوليسترين-ثنائي الفينيل بنزين السلفوني على شكل + )Ca2 عن طريق الفصل الإزوقراطي بواسطة محلول مائي من ملح ثنائي الصوديوم لحمض الإيثيلين ثنائي الأمين رباعي الأستيك )EDTA( كطور متحرك. يتم الكشف عن السكريات والسوربيتول بواسطة جهاز قياس الانكسار التفاضلي ويتم تحديد كميتهما بالنسبة لمعيار خارجي. .4 الكواشف تستخدم فقط الكواشف ذات نوعية تحليلية معترف بها والماء الذي لا تقل جودته عن .3 1.4 محلول الكالسيوم ثنائي الصوديوم ل EDTA، O( .xH CaNa O N H )C c = 0,1 ملي مول/ لتر 2 2 8 2 12 10 في لتر من الماء ذي جودة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء. 2.4 محلول معياري يحضر محلول معياري من الغلوكوز والفركتوز والسوربيتول والسكروز بتركيز 10 غ/ل في الماء. .5 الأجهزة الأجهزة المتداولة في المخبر، وعلى الخصوص، الأجهزة الآتية : 1.5 مكونات الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء تتكون من مضخة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، وعمود ( 2.5 ) الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء مع جهاز قياس الانكسار التفاضلي، ونظام تسخين العمود. 2.5 عمود الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء عمود تبادل الكاتيونات من بوليسترين ثنائي الفنيل بنزين سلفوني على شكل الكالسيوم، بحجم جزيئات 10 ميكرومتر، طول 30 سم، القطر الداخلي 6,5 ملم، يمكن استعمال عمود بأبعاد أخرى إذا أعطى نتائج مماثلة. 3.5 جهاز ترشيح بحقنة، مزود برشاحة محبة للماء غير معقمة، ببعد المسامات 0,45 ميكرومتر. 4.5 جهاز الطرد المركزي قادر على توليد تسارع مركزي يبلغ 1400g .

ملاحظة : تسمح المعادلة الآتية بحساب التواتر الدوراني المطلوب بهدف الحصول على تسارع مركزي صحيح : 000(2 1 )n/ xrx 11,18 = a (1)....

حيث : a هو التسارع المركزي، r هو نصف قطر جهاز الطرد المركزي، بالسنتيمتر، يقاس بين المركز (محور جهاز الطرد المركزي) وقاع الأنبوب عندما يخضع هذا الأخير لعملية الطرد المركزي، n هو تواتر الدوران بالدقيقة. 5.5 أنابيب للطرد المركزي .6 طريقة العمل 1.6 عموميات يجب أن يتم التحليل بهذا المنهج على أساس الحجم، حيث يتم التعبير عن النتائج لكل لتر من العينة. من الممكن أيضا إجراء تحليل العينات المركزة على أساس الحجم بعد التخفيف إلى كثافة معروفة.

في هذه الحالة، يجب الإشارة إلى الكثافة النسبية.

استنادا إلى عينة موزونة وبالنظر إلى عامل التخفيف للتحليل، يمكن أيضا التعبير عن النتائج لكل كيلوغرام من المنتوج.

عندما تكون المنتوجات ذات لزوجة عالية و/أو لها عدد كبير جدا من الخلايا (مثل اللب)، يتم إجراء المعايرة عادة على أساس عيّنة التجربة موزونة. 2.6 تحضير عيّنة التجربة تخلط العيّنات المعكرة جيدًا قبل التخفيف. تُخفف العصائر ذات التركيز الأولي مسبقًا بحجم واحد من العصير بأربعة أحجام من الماء، وتخضع لعملية الطرد المركزي عند 1400g لمدة 15 دقيقة. بعد الترشيح على جهاز الترشيح بحقنة ( 3.5 )، تصبح العيّنة جاهزة للتحليل باستخدام CLHP . 3.6 شروط الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء المذيب محلول الكالسيوم ثنائي الصوديوم )2.4(EDTA، التدفق 0,5 ملل/دقيقة، درجة حرارة العمود 90 °م (أو تبعاً لتعليمات مصنّع الأعمدة).

الحجم المحقون 10 ميكرولتر (كقاعدة عامة).

ملاحظة : يجب الحفاظ على جهاز قياس الانكسار التفاضلي عند درجة حرارة ثابتة، قريبة من درجة حرارة الغرفة( 25 °م إلى 35 °م). 4.6 تحليل الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء بعد موازنة مكوّنات CLHP والعمود، تحدد أوقات احتجاز السكريات والسوربيتول عن طريق حقن محاليل مكوّنة من مركب واحد. يجب التحقق من عدم حدوث استقلاب للسكروز في العمود في الظروف المختارة. يمكننا متابعة التحليل على عيّنة معيارية مختلطة. تحقن محاليل المعايرة في فترات منتظمة من حقن عيّنات التجربة ( على سبيل المثال كل خمس أو سبع حقنات).

يمثل النموذج أ منحنى لمعايرة السكريات والسوربيتول عن طريق الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء. .7 الحساب تُحدد تراكيز السكريات والسوربيتول بطريقة المعايير الخارجية، حسب مساحات أو ارتفاعات الذروة. يجب أن يأخذ الحساب بعين الاعتبار عامل التخفيف المحتمل والنسبة بين التراكيز الكتلية أو الحجمية. إذا تعلق الأمر بعصير مُعاد تشكيله من منتوج مركّز، يجب الإشارة إلى الكثافة النسبية لعيّنة العصير. يحسب تركيز السكريات والسوربيتول بواسطة المعادلة الآتية : 20 الجريدة الرسميّة للجمهوريّة F p = ρ (2)....

X — = ρ RF حيث :

P : هو مساحة أو ارتفاع ذروة السكر أو السوربيتول المحلل حسب المنهج المختار، F : هو عامل التخفيف 5( للعصائر، أما بالنسبة للمركزات المخففة يجب حساب عامل التخفيف)، RF : هو عامل الاستجابة المناسب للسكر أو السوربيتول الذي يتم تحليله، والذي يتم حسابه بواسطة المعادلة الآتية :

Ps

— = RF (3).... ρs حيث :

Ps : هو مساحة أو ارتفاع الذروة للسكر المحلل أو السوربيتول على الكروماتوغرام المعياري، ρs : هو التركيز الكتلي للسكر المحلل أو السوربيتول في محلول معياري.

يجب الإشارة إلى تركيز الغلوكوز والفركتوز والسوربيتول والسكروز بالغرام لكل لتر بأخذ رقم واحد بعد الفاصلة.

الملاحظة 1 : يتم تحديد عوامل الاستجابة المنفصلة للغلوكوز والفركتوز والسوربيتول والسكروز بواسطة المعادلات المذكورة أعلاه والمعطيات المناسبة.

الملاحظة 2 : أثناء تقييم المنهج عن طريق إجراء التجارب ما بين المخابر، يتم أيضا تحديد تراكيز السكريات باستخدام مناهج إنزيمية. تبين أن المناهج الإنزيمية تعطي تكرارية أفضل للغلوكوز والفركتوز، بينما بالنسبة للسكروز، فإن المنهج الذي يعطي تكرارية أفضل هو منهج CLHP . .8 الموثوقية 1.8 . التكرارية يجب ألاّ يتجاوز الفرق المطلق بين نتيجتين فرديتين تم الحصول عليهما على نفس المادة الخاضعة للتجربة، من طرف تقني يستخدم نفس الأجهزة في فترة زمنية قصيرة، قيمة التكرارية )r( في أكثر من %5 من الحالات.

القيم هي كالآتي :

الجدول 1 العينة غلوكوز فركتوز سكروز سوربيتول (غ/ل) (غ/ل) (غ/ل) (غ/ل) عصير التفاح 1,3 1,6 0,9 0,3 عصير البرتقال 1,1 1,1 1,4 غ م )1 نكتار الكرز 1,4 1,2 2,4 0,5 عصير العنب 2,0 1,7 غ م )1 غ م )1 1 غ م = غير مقاس بسبب عدم وجوده في العصير المعني 2.8 . إعادة التجربة :

يجب ألا يتجاوز الفرق المطلق بين نتيجتين فرديتين تم الحصول عليهما على نفس المادة الخاضعة للتجربة في مخبرين قيمة إعادة التجربة )R( في أكثر من %5 من الحالات.

القيم هي كالآتي :

الجدول 2 الفواكه غلوكوز فركتوز سكروز سوربيتول (غ/ل) (غ/ل) (غ/ل) (غ/ل) عصير التفاح 2,9 6,1 3,0 0,9 عصير البرتقال 3,1 3,1 2,5 غ م )1 نكتار الكرز 6,2 6,5 8,3 1,7 عصير العنب 5,1 9,0 غ م )1 غ م )1 1 غ م = غير مقاس بسبب عدم وجوده في العصير المعني 24 ربيع الأوّل عام 1447 ه الجريدة الرسميّة للجمهوريّة 17 سبتمبر سنة 2025 م نموذج أ مثال عن منحنى معايرة السكريات والسوربيتول عن طريق الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء الشكل أ- 1 : مثال عن منحنى معايرة السكريات والسوربيتول العمود المبين في الفقرة )2.5( الشاطف كالسيوم ثنائي الصوديوم ل EDTA ( 1.4 ) في الماء التدفق 0,5 ملل/د الكاشف RI )1.5( حجم الحقن 10 ميكرولتر محلول معياري حوالي 10 ملغ/ ملل من كل مادة في الماء (4) الجدول الذروة المادة 1 سكروز 2 غلوكوز 3 فركتوز 4 سوربيتول عن طريق الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (4) زمن الاحتباس (دقيقة) ,26 7 ,86 8 ,40 11 18,53 22 الجريدة الرسميّة للجمهوريّة